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          超濾離心管使用前需了解哪些內容呢

          發布日期: 2023-03-16
          瀏覽人氣: 914
          離心管是一個簡單的可以承受高轉速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀。超濾離心管會有一個類似于內管和外管的兩個部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內管中),就是超濾的原理.常用于濃縮樣品。
          選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量**過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為準。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
          超濾離心管是否要預處理:
          超濾離心管通常不需要預處理即可使用,不過對于蛋白質樣本處理,特別是較稀的蛋白質溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附*小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時候,會有問題。非特異結合的程度隨著個別蛋白結構的不同而不同。含有帶電的或者疏水結構域的蛋白質更易于不可逆結合到不同表面。對超濾離心管表面做鈍化預處理可降低蛋白質在膜表面的吸附性損失,大多數情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預處理柱子可以提高回收率,因為溶液可填滿膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點。鈍化的方法是預先用*高容積的鈍化溶液預浸泡柱子1小時以上,蒸餾水沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用,需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。 
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